文档名：脱γ羧基凝血酶原蛋白的原核表达与鉴定
摘要：为实现脱-γ-羧基凝血酶原(des-γ-carboxy-prothrombin,DCP)在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的DCP基因CDS序列(LX095963),在保证DCP蛋白氨基酸序列正确的基础上,优化该基因的密码子;化学合成CDS序列基因,并将其融合至pET28a(+)质粒中,构建pET28a(+)/DCP重组质粒;将该质粒转化至感受态BL21(DE3)中进行诱导表达,利用Ni柱纯化DCP蛋白,进行DCP重组蛋白纯度检测、浓度测定及蛋白印迹分析.结果表明:重组质粒在1875bp处的双酶切条带,经测序后与已优化的基因序列完全切合.重组菌的DCP蛋白表达最高时,诱导条件为25℃、IPTG终浓度为0.8mmol/L、时间6h;经Ni柱纯化后的DCP重组蛋白纯度较高,浓度达1.04mg/mL;在72kD处有明显的蛋白条带,切合预期.在大肠杆菌系统中成功表达出DCP蛋白,为后续DCP检测方法研究提供试剂参考.
作者：龚吕鸿 徐丽 刘雅楠 吴胜昔 许东 秦萍 韦广苗 曾鹏 Author：GONGLyuhong XULi LIUYanan WUShengxi XUDong QINPing WEIGuangmiao ZENGPeng
作者单位：重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆400054重庆市第七人民医院,重庆400054
刊名：重庆理工大学学报 PKU
Journal：JournalofChongqingInstituteofTechnology
年，卷(期)：2023, 37(10)
分类号：R392-33
关键词：脱-γ-羧基凝血酶原 Ni柱纯化 原核表达 蛋白免疫印迹
机标分类号：S858.92R575R322.81
在线出版日期：2023年6月15日
基金项目：重庆市教委科学技术研究项目，重庆理工大学研究生创新基金项目，大学生创新创业训练计划项目脱-γ-羧基凝血酶原蛋白的原核表达与鉴定[
期刊论文] 重庆理工大学学报--2023, 37(10)龚吕鸿 徐丽 刘雅楠 吴胜昔 许东 秦萍 韦广苗 曾鹏为实现脱-γ-羧基凝血酶原(des-γ-carboxy-prothrombin,DCP)在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的DCP基因CDS序列(LX095963),在保证DCP蛋白氨基酸序列正确的基础上,优化该基因的密码子;化学合成CDS序列基因,并将其融...参考文献和引证文献
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