稳定同位素马来酸酐标记结合液相色谱质谱技术在定量蛋白质组学中的应用研究

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以合成的多肽为模型，研究了马来酸酐对赖氨酸侧链氨基和多肽N端氨基的衍生化反应。借助于MALDI-TOF质谱的表征和评价，优化了反应溶液、反应时间、反应物比例等实验条件。进而，将该方法应用于蛋白溶菌酶及Hela全细胞裂解液蛋白质组的定量分析，结果表明这一标记方法具有标记效率高、定量准确的特点。另外，在一次标记的基础上，探究了二次标记的可能性。分别采用了半胱氨酸、巯基乙醇、丙硫醇等巯基试剂和马来酸酐衍生产物上的不饱和双键进行“点击反应”，实现了蛋白质和多肽的二次标记，并最终应用于Hela全细胞裂解液蛋白质组的定量分析。通过对标记前后多肽在液相的保留时间进行比较，发现马来酸酐标记后增加了多肽的疏水性，有利于较短多肽的分析与鉴定，从而提高了蛋白质鉴定的序列覆盖率和准确性。
作者：田姗姗 郑淑珍 何锡文 张锴 张玉奎
作者单位：天津医学表观遗传学协同创新中心,天津医科大学基础医学院,生物化学与分子生物学系,天津300070南开大学化学学院,天津300071中国科学院大连化学物理研究所,国家色谱研究分析中心,辽宁116023
母体文献：第21届全国色谱学术报告会论文集
会议名称：第21届全国色谱学术报告会  
会议时间：2017年5月19日
会议地点：成都
主办单位：中国化学会
语种：chi
分类号：R44O65
关键词：蛋白质组学  马来酸酐标记  液相色谱  质谱分析
在线出版日期：2019年4月25日
基金项目：
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