基于适配子识别和DNA模板技术研究适配子蛋白相互作用

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核酸适配体常被用做识别生物标志物的分子探针,此前,已发展了一种基于适配体的"fishing"方法来识别疾病细胞的生物标志物.然而,由于适配体和靶分子间弱的非共价作用,这一方法的应用受到限制.光亲和标记技术由于可以将蛋白与DNA、小分子和其他蛋白共价连接.利用光亲和标记技术研究了适配体与组蛋白的相互作用.本文结合核酸适配体的识别和灵活的光交联共价模式，构建了一种双链核酸适配体探针用于对溶菌酶的标记和富集，其中BP(bindingprobe)包含两部分：一段为未修饰的溶菌酶适配体和一段单链DNA。CP(captureprobe)包括一段互补的DNA序列、一个光交联剂和一个荧光标签(FAM)或生物素标签。整个流程分为五步：1、Aptamer-BP先与目标蛋白(LYS)作用识别；2、加入CP，通过DNA自组装，让光交联剂足够靠近目标蛋白；3、在紫外下引发交联；4、捕获的蛋白可通过荧光标签或生物素检测或富集；5、目标蛋白通过质谱鉴定指认。由于适配子结合探针附近没有化学官能团干扰，能够保证适配体与溶菌酶的亲和识别，而随着DNA自组装，光交联基团快速引入和激发，将溶菌酶共价键合到探针上，可以提高富集效果。通过优化探针和分析条件，实现了探针在复杂背景中对溶菌酶的高灵敏、高选择标记和富集。
作者：毕文静柏雪田姗姗翟贵金张锴
作者单位：天津医科大学基础医学院,天津市医学表观遗传学重点实验室,天津300070
母体文献：第21届全国色谱学术报告会论文集
会议名称：第21届全国色谱学术报告会  
会议时间：2017年5月19日
会议地点：成都
主办单位：中国化学会
语种：chi
分类号：R73R39
关键词：溶菌酶  核酸适配体  脱氧核糖核酸化学模板  组蛋白  光交联共价模式
在线出版日期：2019年4月25日
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