基于DNA自组装亲和光交联分析组蛋白修饰介导复合物

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构建了二元探针系统，首先通过探针1上的蛋白修饰亲和识别结合蛋白，然后利用探针1特有的DNA序列，将探针2通过DNA自组装靶向引导至结合蛋白，再引发光交联将结合蛋白键合到带有富集或检测标签的探针2，进而实现了较弱的蛋白分子间作用转化为稳定的共价键，并保持了修饰与结合蛋白的专一性识别，从而实现低丰度、弱作用蛋白复合物的高灵敏富集和分析。以组蛋白H3K4me3与其特定蛋白结构域PHD为例，在优化探针骨架、交联反应和分析方法的基础上，建立了的高选择性、高灵敏的检测方法。在此基础上，将探针富集与蛋白质组学技术相结合，在实际体系中鉴定到包括BPTF在内的很多己知的结合蛋白，同时还发现了多个未见报道但具有识别结构域的结合蛋白。这一工作为“修饰介导的蛋白-蛋白弱作用”鉴定提供了新的分析策略，结果表明：这一方法不仅可以高灵敏表征组蛋白修饰与结合蛋白的相互作用，也可用来筛选发现组蛋白修饰新的结合蛋白，因此在生物医学领域具有潜在的应用前景。
作者：柏雪田姗姗翟贵金张锴
作者单位：天津医科大学生物化学与分子生物学系,天津市医学表观遗传学重点实验室,天津,300070
母体文献：第21届全国色谱学术报告会论文集
会议名称：第21届全国色谱学术报告会  
会议时间：2017年5月19日
会议地点：成都
主办单位：中国化学会
语种：chi
分类号：R73R39
关键词：结合蛋白  组蛋白  结构修饰  DNA自组装亲和光交联
在线出版日期：2019年4月25日
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